北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2 均质器。
5.3 旋涡混匀器。
5.4 恒温空气浴摇床。
5.5 固相萃取装置。
5.6 吹氮浓缩仪。
5.7 分析天平:感量0.1mg和0.01g。
5.8 移液器:10uL~100uL和100uL~1000uL。
5.9 聚丙烯离心管:15 mL和50 mL,具塞。
5.10 容量瓶:100mL和1000mL。
5.11 离心机:转速不低于5000 r/min。
6 试样制备与保存
6.1 试样制备
河豚鱼、鳗鱼取连皮的鱼肉,将皮、肉分离后取鱼皮置于微波炉中,加热后连同鱼肉、鳗鱼制品取所有可食部分一并放入组织捣碎机均质,充分混匀,装入清洁容器内,并标明标记。
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2 试样保存
试样于-18℃以下保存,新鲜或冷冻的组织样品可在2℃~6℃贮存72 h。
7 测定步骤
7.1 样品提取
称取待测样品5.0g(精确至0.01g)于50 mL具塞离心管中,加入10 mL乙酸钠缓冲溶液(4.10),30 uL葡萄糖苷酸/硫酸酯酶(4.9),旋涡振荡2 min,置于37℃恒温空气浴摇床中酶解16 h。酶解后的样品溶液冷却至室温后,加入10 mL乙腈(4.2),旋涡混匀1 min,在往复式振荡器上振荡提取5 min,3000r/min离心5 min,将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈,重复提取一次,5000r/min离心5 min,合并乙腈层。在乙腈提取液中加入5g氯化钠(4.6),旋涡混匀1 min,5000r/min离心3 min。取上层乙腈层8 mL于15 mL离心管中,加入4 mL、乙腈饱和正己烷溶液(4.11),充分振摇,5000r/min离心3 min,弃去上层有机溶液。再加入4 mL乙腈饱和正己烷溶液,重复上述操作一次。将经脱脂处理后的乙腈提取液置于45℃水浴下吹氮浓缩至2 mL,加水定容至10 mL,待净化。
7.2 净化
将7.1中所得溶液转入活化好的HLB固相萃取柱(4.19)中,以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱,弃去流出液。再分别用3 mL 20%乙腈水溶液(4.12)、3mL水淋洗,弃去流出液,用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中,45℃水浴下吹氮浓缩至近干,用样品定容溶液(4.13)溶解并定容至1.0 mL,旋涡混匀后过0.2um滤膜(4.20),用液相色谱-串联质谱仪测定。
7.3 基质空白液和基质混合标准工作液的制备
称取阴性样品5.0g(精确至0.01g)于50 mL具塞离心管中,按7.1和7.2操作制备基质空白液;混合标准工作液根据需要于使用前用基质空白液配制。
7.4 测定条件
7.4.1 液相色谱参考条件
a)色谱柱:C18色谱柱,1.7um, 50 mm×2.1 mm(内径)或相当者;
b)柱温:40℃;
c)进样量:10uL;
d)流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。
表1 流动相、流速及梯度洗脱条件
7.4.2 质谱参考条件
a)离子化模式:电喷雾离子源;
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应监测(MRM) ;
d)分辨率:单位分辨率;
e)电喷雾电压:3000V ;
f)辅助气流速:700L/h;
g)碰撞气:氢气;
h)幕帘气流速:50 L/h;
i)离子源温度:105℃;
J)辅助气温度;400℃;
k)定性离子对、定量离子对、采集时间、锥孔电压及碰撞能量见表2。
表2 烯丙孕素和氯地孕酮测定的质谱参数
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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