北京普天同创生物科技有限公司
6 试样的制备与保存
6.1 试样的制备
实验室样品混合均匀,分出0.5kg作为试样。
6.2 试样保存
试样置于-18℃冰柜,避光保存。
7 测定步骤
7.1 待测样品溶液的制备
7.1.1 样品提取和初净化
称取河豚鱼或鳗鱼样品10 g(精确到-0.01g),置于100 mL离心管中,加入30mL 5%磷酸溶液(4.9),均质3 min,并用5%磷酸溶液清洗均质器刀头合并洗涤液,加入3 mL三氯乙酸溶液(4.11)涡旋混合后在4000r/min下离心10 min。上清液全部倒入下接苯磺酸型固相萃取柱(4.18)的贮液器中,在固相萃取装置上使样液以小于2 mL/min的流速通过萃取柱,待样液全部通过固相萃取柱后,依次用5 mL 5%磷酸溶液(4.9)和10 mL水洗涤苯磺酸型固相萃取柱(4.18),弃去全部流出液。用20 mL磷酸盐缓冲溶液(4.10)洗脱至50 mL离心管中。
7.1.2 样品溶液再净化
上述洗脱液倒入下接羧酸型固相萃取柱(4. 19)的贮液器中,在固相萃取装置上使样液以小于2 mL/min的流速通过萃取柱,待样液全部通过固相萃取柱后,依次用10 mL水和10 mL 25%甲醇溶液(4.14)洗涤羧酸型固相萃取柱(4.19),弃去全部流出液。减压抽干羧酸型固相萃取柱(4.19)30 min,用2 mL SPE洗脱液(4.13)洗脱至5 mL刻度离心管中,用SPE洗脱液(4.13)定容至2.0mL,混匀后过0.2 um滤膜(4.20),供液相色谱-串联质谱测定。
7.2 基质混合标准校准溶液的制备
称取五个阴性河豚鱼或鳗鱼样品10g(精确到0.01g),分别置于100 mL具塞离心管中,加入适量混合标准溶液(4.17),制成链霉素、双氢链霉素和卡那霉素含量均为5.0 ug/kg、10.0ug/kg、20.0ug/kg、100.0ug/kg和200.0ug/kg的基质标准溶液。其余按7.1步骤操作完成。
7.3 测定条件
7.3.1 液相色谱参考条件
a)色谱柱:Atlantis C18,3.5um,150 mm×2.1 mm(内径)或相当者;
b)柱温:40℃;
c)进样量:30 uL;
d)流动相:流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液,流动相C为甲醇。
梯度洗脱参考条件见表1。
表1 液相色谱梯度洗脱参考条件
7.3.2 质谱参考条件
a)离子源:电喷雾离子源(ESI);
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应监测(MRM);
d)电喷雾电压(IS): 5000V;
e)辅助气(AUX)流速:7L/min;
f)辅助气温度(TEM) :550℃;
g)聚焦电压(FP): 150V;
h)链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的质谱参数见表2。
表2 链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的质谱参数
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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