5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离(ESI)源。

5.2 天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3 组织捣碎机。

5.4 高速冷冻离心机：转速可达15000r/min，致冷可达4℃。

5.5 离心机：4000r/min。

5.6 旋涡振荡器。

5.7 电热恒温振荡水槽。

5.8 pH计。

5.9 旋转蒸发仪。

5.10 固相萃取装置。

5.11 氮吹仪。

6 试样制备和保存

6.1 试样制备

河豚鱼、鳗鱼取连皮的鱼肉，将皮、肉分离后取鱼皮置于微波炉中加热后连同鱼肉、鳗鱼制品取所有可食部分一并放入组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 试样保存

试样于-18℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2℃～6℃贮存72h。

7 测定步骤

7.1 提取

准确称取5g(精确到0.01g)测试样品于50 mL聚丙烯离心管内，加入50uL 10ng/mL的内标物，加入20 mL 0.1 mol/L盐酸溶液(4.14),涡旋混匀，于37℃下避光水浴振荡16 h(过夜)，取出冷却至室温，加入5 mL 0.1 mol/L高氯酸溶液(4.13),涡旋混匀，4℃下15000r/min离心10 min，分取10 mL上清液转移至另-50 mL离心管内。用10mol/L氢氧化钠溶液(4.12)调节pH值至9.7±0.3，加入约2g氯化钠后，再加25 mL异丙醇-乙酸乙酯(3+2),涡动提取2 min, 4500r/min离心5 min，取出上清液至另-50 mL离心管中。再在下层水相中加15 mL乙酸乙酯-异丙醇(7+3),涡动提取1 min, 4500 r/min离心5 min，合并有机相，40℃下旋转蒸发至近干，加入5 mL 0.1mol/L盐酸溶液(4.14)，涡动1 min，待净化。

7.2 净化

将7.1所得溶液以约1mL/min的流速全部过混合型阳离子交换反相吸附固相萃取柱(4.24)，依次用3 mL水、3mL 2％甲酸水溶液和2 mL甲醇淋洗，抽干，用5 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液于40℃下以氮气吹至近干，以0.5mL甲醇-0.1％甲酸溶液(4.16)溶解，涡动混匀，过0.2 um滤膜(4.25)，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g(精确至0.01g)，按7.1和7.2步骤操作。

7.4 液相色谱-串联质谱测定

7.4.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Acquity UPLC BEH C₁₈,1.7 um, 55 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)流动相：A为5 mmol/L乙酸铵溶液(4.15),B为0.1％甲酸乙腈，梯度洗脱，洗脱程序见表1;

表1 梯度洗脱程序

c)流速：0.25 mL/min;

d)柱温;30℃；

e)进样量：10 uL。

7.4.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾源(ESI)，正离子模式；

b)扫描方式：多反应监测(MRM);

c)毛细管电压：1.5kV;

d)源温度：120℃；

e)去溶剂温度：450℃；

f)锥孔气流(氮气):45L/h;

g)去溶剂气流(氮气):700L/h;

h)碰撞气压(氢气)：2.20×10-6 Pa;

i)驻留时间：0.20s。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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