北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器
5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪:配有电喷雾的离子源。
5.2 电子天平:感量0.1 mg和0.1 g。
5.3 离心机:最大转速为10000 r/min。
5.4 离心管:锥形底玻璃离心管,15 mL和10 mL具塞;锥形底聚丙烯离心管,50 mL,具螺旋盖。
5.5 过滤器:聚四氟乙烯膜过滤器:0.2 um×13mm;尼龙膜过滤器:0.2 um×47mm。
5.6 液体分配器:1 mL~10 mL和5 mL~50 mL。
5.7 微量移吸器:10uL~100uL和100uL~1000 uL。
5.8 流动相过滤装置。
5.9 氮气浓缩仪。
5.10 高速涡流混合器。
5.11 振荡器。
5.12 食物调理机。
5.13 一次性移液管。
5.14 酸度计:测量精度为±0.02unit。
5.15 超声波仪。
5.16 一次性注射器:1 mL。
5.17 试样瓶:2.0mL。
6 试样的制备与保存
6.1 试样的制备
猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织,猪肉要去皮和骨头。将其搅碎拌匀。分出0.5kg作为试样,将制备好的试样密封,并做上标记。
6.2 试样保存
将试样置于-18℃条件下贮存。
7 测定步骤
7.1 提取
称取试样2.00g(精确到0.01g)放入50 mL聚丙烯离心管中,加入200uL乙腈进行涡流混合,混合后加入400 uL 5 mol/L氢氧化钠溶液,并进行涡流混合30 s。在(80±5)℃水浴中放置1h。在此期间,要对每个测定样品进行两次涡流混合。1h后,将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚,置于振荡器上高速振荡15 min,离心15 min(转速为4000r/min)。吸出上清液,定量将特定基甲醚转移到干净的 15 mL的玻璃离心管内,待净化。
7.2 净化
在上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3)3 mL,振荡10 min,离心10 min(4000r/min)。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚,振荡5 min,离心5min(4000r/min),吸出特丁基甲醚层,弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚,振荡15 min,离心5min(4000r/min)。定量吸取特丁基甲醚转移到一个干净的10 mL的离心管中。在40℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000uL流动相溶液(4.17),进行涡流混合,超声处理10 min。用0.2 um×13 mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液,将样液转移到试样瓶中,供液相色谱-串联质谱测定。
7.3 色谱测定
7.3.1 液相色谱条件
a)色谱柱:Inertsil ODS-3,5 um, 150 mm×2.1 mm(内径),或相当者;
b)柱温:35℃;
c)进样量:20uL;
d)色谱柱总流量:200 uL/min;
e)流动相及梯度,见表1。
表1 流动相及梯度
7.3.2 质谱条件
a)离子源:电喷雾离子源;
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应检测(MRM);
d)电喷雾电压(IS) : 5000V;
e)雾化气压力(CAS1) :482.6 kPa;
f)气帘气压力(CUR) :68.9kPa;
g)辅助气压力(CAS2) :482.6kPa;
h)离子源温度(TEM) :700℃;
i)接口加热:ON;
J)定性离子对、定量离子对、采集时间(Dwell)、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)、入口电压(EP)及碰撞室出口电压(CXP),见表2。
表2 六种镇定剂及其代谢产物和β-阻断剂的质谱参数
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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