5．色谱柱的选择随着液相色谱填料制备技术的进步，有许多的色谱柱公司设计开发了不同类型的色谱填料以适应不同类型化合物的分离。根据填料的物理和化学参数，USP对色谱柱的类型进行了分类，如十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱(C₁₈)命名为L1，然而并非所有L1(C₁₈)柱都有相同的分离能力，色谱柱来自不同的制造厂商，具有不同的色谱行为，因此彼此之间并不能互相替代，目前市场上仅L1(C₁₈)就有近800种。各国药典中均只是简单地规定色谱柱的大类，但某些类型的药物对色谱柱要求较为严苛，如阿莫西林胶囊的有关物质，利用不同厂家的C₁₈柱检测结果具有明显差异(表14-3)。

表14-3A 色谱柱对阿莫西林胶囊有关物质检出的影响考察-最大单个杂质(％)

表14-3B 色谱柱对阿莫西林胶囊有关物质检出的影响考察-杂质总量(％)

色谱柱是HPLC分离过程的核心，稳定、高效的色谱柱对建立专属性强、重现性好的方法是必不可少的。不同供应商的色谱柱，甚至来源相同不同批次的色谱柱之间，可能也会存在分离能力的差异，即不同色谱柱在理论塔板数、峰的对称性、保留时间、以及使用寿命上会有很大的差异。因此，应考察色谱柱的品牌对主成分以及有关物质分离能力的影响程度。一般应选取3种品牌的色谱柱进行比较，应尽量采用对色谱柱品牌没有特殊要求的色谱系统，如果该药物的有关物质检查对色谱柱有特殊要求，只能特别注明所使用的色谱柱的具体品牌和规格。尽管色谱柱生产企业有严格的质量控制系统，也很难保证不同批次的色谱柱对某个特定化合物的分离能力都相同，可以使用同一品牌不同批次的色谱柱进行系统适用性考察，在极端情况下，由于目前不能解释的原因，只有特定品牌特定批次的色谱柱能够满足系统适用性要求的情况亦有存在。

为解决上述问题，EP、BP、USP在药品标准中给出了色谱柱长度、内径、填料粒径、含碳量、流速、进样体积等色谱参数。BP甚至在制剂品种采用HPLC方法进行有关物质或色谱纯度检查时，对色谱柱有明确的规定，比如阿替洛尔注射液、阿替洛尔口服溶液在有关物质检查中建议使用150mm×4.6mm,粒径为5um的Spherisorb ODS2色谱柱；《中国药典》2015年版中已有部分品种在有关物质检查或含量测定中特别注明了色谱柱的品牌与规格，如双环醇建议使用250mm×4.6mm ,粒径为5um的Symmetry C₁₈色谱柱；磷酸咯萘啶建议使用250mm×4.6mm，粒径为5um，孔径100A的Sepax sapphier C₁₈色谱柱。

《中国药典》2015年版中，一些对色谱柱要求较高的品种给出了系统适用性典型色谱图，如曲克芦丁，标准中建议使用Venusil MP C₁₈,4.6mm×250mm,5um的色谱柱，并给出了系统适用性图谱(图14-6)，早期版本EP与BP部分品种在有关物质检查项下给出了典型色谱图，现大多以系统适用性混合对照品替代，并在对照品的说明书中附上系统适用性典型色谱图。

图14-6 《中国药典》2015年版附曲克芦丁系统适用性色谱图
1．四羟乙基芦丁；2. 一羟乙基芦丁；3．芦丁；4．曲克芦丁；5．二羟乙基芦丁

鉴于不同色谱柱牌号、填料或粒径等可能对色谱分离产生显著影响，中国食品药品检定研究院(简称中检院)提供的化学对照品也开始提供典型色谱图以及色谱柱信息，如恩曲他滨异构体检查系统适用性试验混合物(图14-7)。

图14-7 中检院恩曲他滨异构体检查系统适用性试验混合物对照品提供的信息

上述这些信息都是为了更好地执行药品标准，达到控制药品质量的最终目标。关于色谱柱的选择问题可以从色谱柱供应商的网站获得。

相关链接：HPLC法应用于有关物质检查时需要注意的问题（一）

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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