10.5.2.3差示分光光度法

吸光度A在0.2～0.8范围内误差最小。超出此范围，如高浓度或低浓度溶液，其吸光度测定误差较大。尤其是高浓度溶液，更适合用差示法。一般分光光度法测定选用试剂空白或溶液空白作为参比，差示法则选用一个已知浓度的溶液作参比。该法的实质是相当于透光率标度放大。

差示分光光度法与一般分光光度法区别仅仅在于它采用一个已知浓度与试液浓度相近的标准溶液作参比来测定试液的吸光度，其测定过程与一般分光光度法相同，如图10-25所示。然而正是由于使用了这种参比溶液，才大大提高了测定的准确度，使其可用于测定过高或过低含量的组分。

图10-25差示分光光度法测，示意图

(a)高吸收法；(b)低吸收法；(c)最精密法

由实验测得的吸光度用式(10-2)计算。

△A＝A_s-A_x＝εb△c             (10-2)

差示分光光度法常用工作曲线法来定量。以标准溶液的浓度为横坐标，以相对吸光度为纵坐标做工作曲线。测试样时，再以。、为参比溶液，测得相对吸光度△A，即可从曲线上找出试样的浓度c_x。

10.5.3有机化合物的定性及结构分析

分子中生色团和助色团以及它们的共轭情况，决定了有机化合物紫外光谱的特征。因此紫外光谱可用于推定分子的骨架、判断发色团之间的共轭关系和估计共轭体系中取代基的种类、位置和数目。

10.5.3.1初步推断基团

一化合物在220～800 nm范围内无吸收，它可能是脂肪族饱和碳氢化合物、胺、睛、醇、醚、氰代烃和氟代烃，不含直链或环状共轭体系，没有醛酮等基团。如果在210～250 nm有吸收带，可能含有两个双键的共轭体系；在260～300 nm有强吸收带，可能含3～5个共扼双键；250～300 nm有弱吸收，表示有羰基存在；在250-300 nm有中强吸收带，很可能有苯环存在；如果化合物有颜色，分子中含有共轭生色团一般5个以上。

10.5.3.2顺反异构体的推断

例如，顺式和反式1,2-苯乙烯。

顺式异构体一般比反式异构体的波长短而且ε小。这是由于立体障碍引起的，顺式1,2-二苯乙烯的两个苯环在双键同一边，由于立体障碍影响了两个苯环与乙烯的碳一碳双键共平面，因此不易发生共轭，吸收波长短，且ε小。而反式异构体的两个苯环与乙烯双键共平面性好，形成大的共噁体系，吸收波长长，且ε也大。

10.5.3.3化合物骨架的推断

未知化合物与已知化合物的紫外光谱一致时，可以认为两者具有相同的发色团．这一原理可用于推定未知物的骨架。例如，维生素K,(A)有吸收带：λ_max 249nm (1gε4.28),260nm(1gε4.26),325nm(1gε3.28)。查阅文献与1,4-萘醌的吸收带λ_max 250nm (1gε4.6),λ_max330 nm(1gε3.8)相似，因此把(A)与几种已知1,4-萘醌的光谱比较，发现(A)与2,3-烷基-1,4-萘醌(B)的吸收带很接近，这样就推定了(A)的骨架。

文章来源：《分析化学分析方法的原理及应用研究》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。