10.4.1测量条件的选择

10.4.1.1入射光波长的选择

入射光的波长应根据吸收光谱曲线选择溶液有最大吸收时的波长。这是因为在此波长处摩尔吸光系数值最大，使测定有较高的灵敏度。同时，在此波长处的一个较小范围内，吸光度变化不大，不会造成对比尔定律的偏离，测定准确度较高。

如果最大吸收波长不在仪器可测波长范围内，或干扰物质在此波长处有强烈吸收，可选用非最大吸收处的波长。但应注意尽量选择。值变化不太大区域内的波长。以图10-20为例，显色剂与钴配合物在420 nm波长处均有最大吸收峰。如用此波长测定钴，则未反应的显色剂会发生干扰而降低测定的准确度。因此，必须选择500 nm波长测定，在此波长下显色剂不发生吸收，而钴络合物则有一吸收平台。用此波长测定，灵敏度虽有所下降，却消除了干扰，提高了测定的准确度和选择性。

图10-20 吸收曲线

A-钴配合物的吸收曲线；B-亚硝基-2-萘酚-3,6磺酸显色剂的吸收曲线

10.4.1.2吸光度测量范围的选择

在不同吸光度范围内读数会引起不同程度的误差，为提高测定的准确度，应选择最适宜的吸光度范围进行测定。
对一个给定的分光光度计来说，透光率读数误差△T是一个常数，但透光率读数误差不能代表测定结果误差，测定结果误差常用浓度的相对误差△c/c表示。

由朗伯-比尔定律可知

A＝-1gT＝εbc

由上式微分整理可得

要使相对误差△c/c最小，求导取极小得出：当T=0.368(A= 0.434)时，△c/c最小为1.4％。

实际工作中，可以通过调节被测溶液的浓度，使其在适宜的吸光度范围。为此，可以从下列几方面想办法：

①计算而且控制试样的称出量，含量高时，少取样或稀释试液；含量低时，可多取样或萃取富集；

②如果溶液已显色，则可通过改变吸收池的厚度来调节吸光度的大小。

10.4.1.3参比溶液的选择

分光光度法首先以参比溶液调节透光率至100％，然后再测定待测溶液的吸光度，这相当于是以透过参比溶液的光束为入射光。这样，当待测溶液除被测定的吸光物质外，其余成分均与参比溶液完全相同时，就可以消除溶液中其他因素所引起的误差。实际工作中要制备完全符合上述要求的参比溶液往往不可能。但是，应该尽可能地选用合适的参比溶液，以最大限度地消除这类误差。一般选择参比溶液的原则如下：

①如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂作参比溶液。

②如果显色剂或其他试剂略有吸收，应用空白溶液(不加试样溶液)作参比溶液。

③如试样中其他组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶液，当显色剂略有吸收时，可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，以此溶液作参比溶液。

选择参比溶液总的原则是使试液的吸光度真正反映待测物的浓度。

10.4.1.4狭缝宽度的选择

为了选择合适的狭缝宽度，应以减少狭缝宽度时试样的吸光度不再增加为准。一般来说，狭缝宽度大约是试样吸收峰半宽度的1/10。

10.4.2溶剂的选择

溶剂的选择原则为：

①溶剂应能很好地溶解被测试样，溶剂对溶质应该是惰性的，即所成溶液应具有良好的化学和光学稳定性。

②在溶解度允许的范围内，尽量选择极性较小的溶剂。这是因为溶剂对紫外-可见光谱的影响较为复杂。改变溶剂的极性，会引起吸收带形状的变化。

③不与被测组分发生化学反应。

④所选溶剂在测定波长范围内无明显吸收。

⑤被测组分在所选的溶剂中有较好的峰形。

相关链接：紫外-可见分光光度法的基本原理（三）

文章来源：《分析化学分析方法的原理及应用研究》

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