一、案例

磷脂，是含有磷酸基团的脂类，是生命基础物质，它由卵磷脂、肌醇磷脂、脑磷脂等组成，磷脂是人体细胞中的基本成分，细胞膜含有30％0左右的磷脂，所以磷脂是维持生命活动的基础物质。大豆磷脂是一种混合磷脂，它是由磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)、磷脂酰肌醇(肌醇磷脂)、磷脂酰丝氨酸(丝氨酸磷脂)等成分组成，其中前三种最为典型，具有很高的营养价值和医用价值。

二、选用的国家标准

GB／T 21493--2008大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定——高效液相色谱法。

三、测定方法

1．液相系统的平衡

在进样分析前，用流动相平衡液相系统，控制流速为0．5mL／min，保持基线平稳,样品保留时间稳定。

2．标准溶液配制

配制浓度为2mg／mL的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和lmg／mL的磷脂酰肌醇标准混合液：分别精确称取约20mg磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和10mg磷脂酰肌醇，用体积比为8：8：1的正己醇、异丙醇和1％乙酸混合液溶解并定容至10mL，即成标准混合液。

配制不同浓度标准混合液：分别量取上述标准混合溶液0.25mL、1.25mL、2.50mL、3．75mL、5.00mL，再用混合溶剂定容至5mL，配制成含磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺为0.1mg／mL、0.5mg／mL、1.0mg／mL、1.5mg／mL、2.0mg／mL，磷脂酰肌醇为0.05mg／mL、0.25mg／mL、0．50mg／mL、0.75mg／mL、1.OOmg／mL的标准混合液，于低于一16℃密封保存备用。

3．制作标准工作曲线

分别取上述不同浓度的混合标准溶液各10弘L注入液相色谱，以各组浓度为横坐标，各组峰值面积为纵坐标，绘制磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇的标准工作曲线。

4．样品预处理

称取样品15-50mg，用体积比为8：8：1的正己醇、异丙醇和1％乙酸混合液溶解并定容至5mL，于低于一16℃密封保存。

5．测定条件

色谱条件：Si一60柱子，长250mm，内径4．6mm，填充物粒度5µm。

流动相流速：lmL／min。

柱温：30℃。

紫外检测波长：205nm。

6．进样

样液经0.45µm微孔膜过滤后，取样液10µL，注入液相色谱仪，比较样液与标准样品的高效液相色谱图谱，取与标准样品图谱中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇相同时间的峰面积与标准曲线比较定量，每一样品测两次以上。

7．结果计算

X=c*5/m*100

式中 X——样品中磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇或磷脂酰乙醇胺含量，g／lOOg；
c——由标准曲线查出的样液中各被测物浓度，mg／mL；
5——样品定容体积，ml；
m——样品质量，mg。

8．试剂

①正己烷：色谱纯。

②异丙醇：色谱纯。

③1％冰醋酸。

④磷脂酰胆碱(纯度≥99％)。

⑤磷脂酰乙醇胺(纯度≥99％)。

⑥磷脂酰肌醇(纯度≥98％)。

9．仪器

①液相色谱仪。

②液相色谱柱：si一60柱子，长250ram，内径4．6mm，填充物粒度5µm。

③容量瓶：5mL、10mL、100mL。

④刻度吸管：0．5mL、1mL、5mL。

⑤量筒：100mI。、500mL、1000mL．

⑥氮气瓶。