三聚氰胺简称三胺，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，也被称为蛋白精，属于三嗪类含氮杂环化合物。三聚氰胺是白色结晶粉末，主要用于生产三聚氰胺/甲醛树脂。在木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业均有广泛应用。

由于三聚氰胺具有含氮量高的特点，一些造假者利用现行蛋白质检测方法—凯氏定氮法的漏洞，将三聚氰胺非法加人生鲜乳中以增加表观蛋白质含量。食用了含有三聚氰胺的乳制品，可能造成泌尿管的组织增生，从而导致肾脏结石。

目前报道的三聚氰胺检测方法主要有：高效液相色谱法、气质联用法、酶联免疫法、近红外光谱法等。卫生部发布的食品中可能违法添加的非食用物质名单推荐参考GB/T 22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》方法。

(一)实验原理

用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器/二极管阵列检测器检测，外标法定量。

(二)试剂及仪器

1．试剂

(1)除另有说明外，所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。

(2)乙腈(CH₃CN)：色谱纯；磷酸(H₃PO₄)；磷酸二氢钾(KH₂PO₄)；三聚氰胺标准物质(C₃H₆N₆)：纯度大于或等于99%。

(3)三聚氰胺标准储备溶液(1.00×10³mg/L)称取100mg三聚氰胺标准物质(准确至0.1mg)，用水完全溶解后，100 mL容量瓶中定容至刻度，混匀，4℃条件下避光保存，有效期为1个月。

(4)标准工作溶液使用时配制

标准溶液A : 2.00×10² mg/L。准确移取20.0mL三聚氰胺标准储备溶液，置于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

标准溶液B: 0.50mg/L，准确移取0.25mL标准溶液A，置于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

按表6-8分别移取不同体积的标准溶液A于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表6-9分别移取不同体积的标准溶液B于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

(5)磷酸盐缓冲液(0.05mol/L)称取6.8g磷酸二氢钾(准确至0.01g)，加水800mL完全溶解后，用磷酸调节pH至3.0。用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用。

(6)一次性注射器：2mL;滤膜：水相，0.45 um；针式过滤器：有机相，0. 45um；具塞刻度试管：50mL。

表6-8标准工作溶液配制(高浓度)

表6-9标准工作溶液配制(低浓度)

2．仪器

液相色谱仪：．配有紫外检测器/二极管阵列检测器；分析天平：感量0.0001g和0.01g;pH计：测量精度±0.02；溶剂过滤器。

(三)实验步骤

1．试样的制备

称取混合均匀的15g原料乳样品(精确至0.01g)，置于50mL具塞刻度试管中，加入30mL乙腈，剧烈振荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3 min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

2．液相色谱参考条件

色谱柱：强阳离子交换色谱柱，SCX, 250mm x 4.6mm (I. d.)，5 Nm，或性能相当者；流动相：磷酸盐缓冲溶液-乙腈(70 +30，体积比)，混匀；流速：1.5mL/min；柱温：室温；检测波长：240 nm；进样量：20uL。

3．样品测定

(1)定性分析依据保留时间一致性进行定性识别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中三聚氰胺的色谱峰。必要时应采用其他方法进一步定性确证。

(2)定量分析校准方法为外标法。根据检测需要，使用标准工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。使用试样分别进样，获得目标峰面积。根据校准曲线计算被测试样中三聚氰胺的含量(mg/kg )。试样中待测三聚氰胺的响应值均应在方法线性范围内。

当试样中三聚氰胺的响应值超出方法的线性范围的上限时，可减少称样量再进行提取与测定。

4．结果计算

试样中三聚氰胺的含量按式(6-9)计算

式中X—原料乳中三聚氰胺的含量，mg/kg;

ρ—从校准曲线得到的三聚氰胺溶液的浓度，mg/L;

Z—试样定容体积，mL ;

m—样品质量，g。

通常情况下，计算结果保留3位有效数字；结果在0.1～1.0mg/kg时，保留2位有效数字；结果小于0.1 mg/kg时，保留1位有效数字。

5．注意事项

(1)如果保留时间或柱压发生明显的变化，应检测离子交换色谱柱的柱效以保证检测结果的可靠性。

(2)使用不同的离子交换色谱柱，其保留时间有较大的差异，应对色谱条件进行优化。

(3)在色谱柱前加保护柱(或预柱)，以延长色谱柱使用寿命。

(4)强阳离子交换色谱的流动相为酸性体系，每天结束实验时应以中性流动相冲洗仪器系统进行维护保养。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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