北京普天同创生物科技有限公司
(一)适用范围
肉及肉制品中沙门菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲杆菌和大肠杆菌O157: H17的基因芯片检测。
(二)方法提要
针对5种目标菌保守基因片段设计引物,提取待检样品增菌液的DNA为模板进行两个独立的多重PCR扩增。扩增产物与固定有5种目标致病菌特异性探针的基因芯片进行杂交,用芯片扫描仪对杂交芯片进行扫描并判定结果。阳性结果用传统方法确证。
(三)材料和设备
高压灭菌锅、恒温培养箱、微需氧培养装置、高速离心机(2000×g以上)、水浴锅(37、42、70℃) , PCR超净工作台、PCR仪、水平式电泳仪、凝胶成像分析系统、水浴摇床、基因芯片扫描仪、基因芯片清洗仪(可选)、芯片杂交盒、微量可调移液器和灭菌吸头(2、10、100、200、1000 uL)、灭菌PCR反应管。
(四)培养基和试剂
1.缓冲陈水增菌液(BP)、四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)、改良缓冲蛋白陈水(MBP)、增菌培养液(EB) , 10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤、弯曲杆菌增菌肉汤、电泳级琼脂糖。
2.改良E.C新生霉素增菌肉汤[m(EC)n]
胰蛋白胨20g, 3号胆盐1.12g、乳糖5g、无水磷酸氢二钾4g、无水磷酸二氢钾1.5g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL,将上述成分溶于水后校正pH至6.9±1,分装后120℃灭菌15 min ,取出后冷却至室温,以过滤灭菌的新生霉素溶液20mg/L加入,使最终浓度为20ug/mL。
3.晶芯食源性致病微生物检测芯片试剂盒
博奥生物有限公司,可选用其他等效产品。
(1) PCR引物序列引物序列如表5-22所示。
表5-22 PCR反应使用的引物序列
注:对于核酸序列,除了A、C、G、T分别代表各种核酸之外,R代表G或A,Y代表T或C,S代表G或C,H代表A,C或T,N代表A、G、C、T中任意一种。
(2)芯片探针序列芯片探针序列如表5-23所示:
表5-23芯片表面包被的目标菌基因探针序列
(3)缓冲液GA(25 mmol/L EDTA和5% SDS, pH8.0)、缓冲液GB(5mmol/L盐酸胍)、去蛋白液GD(3mmol/L盐酸胍)、漂洗液PW(2mmol/L Tris缓冲液,pH 7.5)、蛋白酶K、吸附柱CB3和收集管、RnaseA溶液、洗脱缓冲液TE( 10mmol/L Tris缓冲液,pH8.0), PCR Mix I、PCR Mix II、Taq酶(5U/uL) , PCR阳性质控基因组DNA(50ng/uL) , GoldView (GV), 2×PCR载样液、DNA分子量标记2000、洗涤液I (2×SSC,0.2 % SDS)、洗涤液II(0.2×SSC)、检测芯片。
(五)检测程序
基因芯片法检测肉及肉制品中常见致病菌的程序如图5 -7所示。
图5-7基因芯片法检测肉及肉制品中常见致病菌的程序
相关链接:基因芯片法对转基因大豆及其产品物种结构特异性基因的定性检测
文章来源:《食品质量与安全检测技术》
版权与免责声明:转载目的在于传递更多信息。
如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。
如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
通话对您免费,请放心接听
温馨提示:
1.手机直接输入,座机前请加区号 如18601949136,010-58103629
2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听
3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听
登录后才可以评论