食品着色剂又称食用色素，是以食品着色为目的的一类食品添加剂。食品着色剂按其来源和性质可分为食品合成着色剂和食品天然着色剂。食品合成着色剂有着色力强、色泽鲜艳、稳定性好、易调色、成本低等的特点，但同时安全性也低。合成着色剂的测定以前主要用薄层层析法，现在主要用高效液相色谱法，本测定方法依据GB5009.35-2016,2017年3月1日开始实施。

(一)测定原理

食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液一液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。

(二)试剂及仪器

1．试剂

(1)正己烷(C₆H₁₄)，盐酸(HC1)，冰醋酸(CH₃COOH)，甲酸(HCOOH)，甲醇(CH₃OH)：色谱纯，正丁醇(C₄H₁₀O)，三正辛胺(C₂₄H₅₁N)，无水乙醇(CH₃CH₂OH)。

(2)乙酸铵溶液(0.02mol/L)称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL ,溶解，经0.45um微孔滤膜过滤。

(3)氨水溶液量取氨水[(NH₃·H₂O)，含量20%～25%] 2mL，加水至100mL,混匀。

(4)甲醇-甲酸溶液(6+4，体积比)量取甲醇60mL，甲酸40mL,混匀。

(5)柠檬酸溶液称取20g柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)，加水至100mL，溶解混匀。

(6)无水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1，体积比)量取无水乙醇 70mL、氨水溶液20mL、水10mL，混匀。

(7)三正辛胺-正丁醇溶液(5%)量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100 mL ,混匀。

(8)饱和硫酸钠(Na₂SO₄)溶液。

(9)pH₆的水在水中加入柠檬酸溶液调pH到6。

(10)pH₄的水在水中加入柠檬酸溶液调pH到4。

(11)聚酰胺粉(尼龙6)过200 目筛。

2.合成着色剂标准溶液

(1)标准品柠檬黄(CAS:1934 21 0)、新红(CAS: 220658 76 4) ,苋菜红(CAS：915 67 3)、胭脂红(CAS: 2611 82 7)、日落黄(CAS: 2783 94 0)、亮蓝(CAS: 3844 459)、赤藓红(CAS: 16423 68 0)。

(2)标准溶液配制

①合成着色剂标准贮备液(1 mg/mL)：准确称取按其纯度折算为100％质量的上述标准品各0.1g(精确至0.0001g)，置于100 mL容量瓶中，加pH6的水到刻度，配成水溶液(100mg/mL)。

②合成着色剂标准使用液(50ug/mL)：临用时将标准贮备液加水稀释20倍，经0.45um微孔滤膜过滤，配成每mL相当于50.0 ug的合成着色剂。

3．仪器

(1)高效液相色谱仪带二极管阵列或紫外检测器。

(2)天平感量为0.001 g和0.0001g

(3)恒温水浴锅。

(4) G₃垂融漏斗。

(三)测定步骤

1．样品处理

(1)果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等称取20～40g(精确至0.001g)，放入100 mL烧杯中。含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳。

(2)配制酒类称取20～40g(精确至0.001g)，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。

(3)硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等食品称取5～10g(精确至0.001g)，粉碎试样，放入100mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若试样溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH到6左右。

(4)巧克力豆及着色糖衣制品称取5～10g(精确至0.0018)，放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。

2．色素提取

(1)聚酰胺吸附法样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃ pH4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次[含赤藓红的样品用(2)法处理]，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5 mL。经0.45 um微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

(2)液-液分配法(适用于含赤藓红的样品)将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2 mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液(5%) 10～20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放入蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加10mL正己烷，混匀，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经0.45um微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

3．高效液相色谱参考条件

(1)色谱柱C₁₈柱，4.6mm×250mm, 5um。

(2)进样量10uL，流速1.0mL/min。

(3)柱温35℃。

(4)二极管阵列检测器波长范围400～800nm，或紫外检测器波长254nm。

(5)梯度洗脱如表3-1所示。

表3-1 梯度洗脱表

4.测定

将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

(四)结果计算

着色剂含量的计算公式为：

式中x—样品中着色剂的含量，g/kg;

P—进样液中着色剂的浓度，mg/mL;

T—样品稀释总体积，mL ;

m—样品质量，g；

1000—换算系数。

计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。精密度：在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄的检出限均为0.5mg/kg，亮蓝、赤藓红的检出限均为0.2 mg/kg(检测波长254nm时亮蓝检出限为1.0mg/kg，赤藓红检出限为0.5 mg/kg)。

相关链接：食品添加剂含量的测定

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。