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平板电泳法在药物分析中的应用——生化药物和药代动力学

发布时间:2014-07-11 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:381

传统电泳法在生物制品和生化药物中应用历史较久,且发挥越来越重要的作用。

胰岛素中有关蛋白检查

本法是用PAGE检查胰岛素中降解产物脱酰胺胰岛素和其它蛋白,但不包括胰岛素的聚合体,测定时在样品缓冲液中加尿素使聚合体解聚。

测定法取胰岛素标准品适量,精密称定,用尿素溶液(取尿素95g、三羟甲基氨基甲烷1.5g与lmol,/L盐酸溶液12ml,加水至200m1)制成每100μ1中含0.5μg/(1)、1.0μg(2)、3.0μg(3)、5.Oμg(4)及100μg(5)的溶液。取供试品适量,精密称定,用上述尿素溶液制成每100μ1中分别含100μg及500μg的溶液。照聚丙烯酰胺凝胶电泳法(《中国药典》二部附录V F)测定,胶条染色后,目测比较各色带的颜色。(1)有明显可见的色带,(1)一(4)色带应呈明显的梯度,否则应重新试验。100μg和500μg供试品管,主带位置应与(5)的主带位置一致;100μg供试品管与(5)管中相应的主带后泳动较快的一条色带,颜色不得深于(3),500μg供试品管与(5)管中相应的主带后泳动较慢的一条色带,颜色不得深于(1)。

讨论:①为检测各有关蛋白的限度,需配制不同浓度的标准溶液和样品溶液。

②为防止扩散,可在每管中加甘油或40%蔗糖溶液1~2滴,也可在各管中加0.04%溴酚蓝指示染料1滴。

③0.5μg标准溶液(1),应有目测可见的染色区带,以验证实验的灵敏度。

药代动力学

在定量结果、移行时间和重复性方面,CE与HPLC相比要差一些,但在药代动力学研究方面,有其独特之处,主要在于所需试样少,试样几乎不需预处理。并且与HPLC相比,分析时间非常短。例如不同类的几十种药物采用CE分离仅要几十秒或数分钟,并可用于分析血浆和尿中大多数的组分。

CE方法在药物分析中的应用不仅仅限于上述几个方面,实际上,药物分析中所有用到HPLC方法的几乎都可用CE方法来完成。


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