高效液相色谱仪自1967年问世以来，由于吸取了气相色谱仪研制的经验，获得快速发展，提供的商品仪有如下两种组合方式：

①完全紧凑的整体系统死体积小、灵敏度高，体现高效液相色谱仪总体实用的特点。

②独立部件的组合系统灵活性高，可根据不同目的，组装成不同的连接方式。

现在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能全面的分析工具。

典型的高效液相色谱仪组成示意图见图9-2。

图9-2  高效液相色谱仪的组成示意图
1-储液罐；2-搅拌、超声脱气器；3-梯度洗脱装置；4-高压输液泵；5-流动相流量显示；
6-柱前压力表；7-输液泵泵头；8-过滤器；9-阻尼器；10-六通进样阀；
11-保护柱；12-色谱柱；13-紫外吸收(或折射率)检测器；
14-记录仪(或数据处理装置)；15-背压调节阀；
16-回收废液罐

以下分别介绍构成高效液相色谱仪的主要部件：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。

一、流动相的储液罐

1．储液罐的构成

储液罐的材料应耐腐蚀，可用玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮(PEEK)。容积为0.5～2.0 L。对凝胶色谱仪、制备型仪器，其容积应更大些。储液罐放置位置要高于泵体，以便保持一定的输液静压差。使用过程储液罐应密闭，以防溶剂蒸发引起流动相组成的变化，还可防止空气中O₂、CO₂重新溶解于已脱气的流动相中。

在通用的液相色谱系统中，应该使用数个溶剂储存器来提供梯度洗脱装置。对某些梯度洗脱法(将在后面讨论)，溶剂的供应可采用多通阀系统从各储存器中连续不断地引出来，此多通阀系统也必须由惰性材料制成。在溶剂储存系统中经常包括这样一个多通阀，以便对不同分析或为了清洗柱的目的能够迅速地选择特定的溶剂。

2．流动相的过滤器

所有溶剂在放入储液罐之前必须经过0.45um滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。溶剂过滤常使用G₄微孔玻璃漏斗，可除去3～4um以下的固态杂质。

对输出流动相的连接管路，其插入储液罐的一端，通常连有孔径为0.45um的多孔不锈钢过滤器或由玻璃制成的专用膜过滤器。

过滤器的滤芯是用不锈钢烧结材料制造的，孔径2～3um，耐有机溶剂的侵蚀。若发现过滤器堵塞(发生流量减小的现象)，可将其浸入稀HNO₃溶液中，在超声波清洗器中用超声波振荡10～15 min，即可将堵塞的固体杂质洗出。若清洗后仍不能达到要求，则应更换滤芯。

3．流动相的减压过滤、抽真空脱气和超声波脱气

流动相在使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体(如O₂)，以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。若在低死体积检测池中，存在气泡会增加基线噪声，严重时会造成分析灵敏度下降，而无法进行分析。此外溶解在流动相中的氧气，会造成荧光猝灭，影响荧光检测器的检测，还会导致样品中某些组分被氧化或会使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。

抽真空脱气：此时可使用微型真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G₄微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系，每种溶剂应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。

超声波脱气：将欲脱气的流动相置放于超声波清洗器中，用超声波振荡脱气，改善脱气效果可通过调节超声波发生器的功率(W)和振荡频率(Hz)来实现。

4．流动相的在线真空脱气

在线真空脱气(on-line degasser)：把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气，并适用于多元溶剂体系(图9-3)。

图9-3  高效液相色谱仪在线脱气结构示意图
1-高压输液泵；2-储液罐；3-膜过滤器；4-塑料膜管线(体积12mL，气体可渗透出来)
的真空腔；5-传感器；6-控制电路；7-电磁阀；8-真空泵；
9-脱气后流动相至过滤器；10-脱气单元

真空脱气机主要由真空腔(内置四通道塑料半透膜管线)和真空泵组成。

真空腔内半透膜管分成四个独立单元，两两组合在一起，半透膜由两种不同的塑料材料组成。可在真空状态下由膜内向膜外渗透气体。真空泵开启后，真空腔内产生真空，真空度由压力传感器测定。通过真空泵的开启或关闭，使真空腔内保持一定的真空度。

流动相在高压输液泵的驱动下，通过真空腔内的塑料半透膜，在真空作用下，流动相中溶解的气体会渗透出塑料半透膜进入真空腔，而被真空泵抽走，当流动相到达真空脱气机出口，就被完全脱气而不含任何气体了。

把真空脱气机串接到储液系统中，与溶剂罐中的膜过滤器组合就实现了流动相在进入高压输液泵前的连续脱气，并可用于多元溶剂系统，这种脱气方法效果好，已在高效液相色谱仪中广泛使用。

相关链接：高效液相色谱法特点