初步确定该化合物的结构为两分子的白藜芦醇通过C-8a和OH-4b相连成为醚键的开链化合物.同时,结合其分子式推断,其C-7a位应为一个羟基取代.在HMBC谱中(图3),H-8a与C-4b的远程相关信号证实C-8a和OH-4b相连;H-8a与C-1a,C-7a,C-10a,C-14a的相关信号进一步证实了该结构的正确性.根据文献报道[11,12],对于由苄羟基和苯氧基组成的8-O-4′新木脂素结构类型的能形成分子内氢键的非对映立体异构体,若其H-7和H-8之间为一个大的偶合常数,则其对应的结构为苏式构型(threoform);相反,若其H-7和H-8之间为一个小的偶合常数,则其对应的结构为赤式构型(erythroform).构象分析表明,化合物3的结构与上述的8-O-4′新木脂素结构相似,由苄羟基和苯氧基组成.根据该规则,在其1HNMR谱中观察到J7,8＝7.5Hz,为一个较大偶合常数,揭示其构型为苏式(threo)。
     另外,在NOESY谱中,H-7a和H-8a之间NOE效应较弱,以及H-7a/2(6)a,10(14)a显示有NOE效应,进一步证实了该构型.从反应机理分析,两个自由基相连后使得C-7a位为平面构型,H2O分子从位阻较小的一面进攻,形成了threo构型的化合物.据此确定了化合物3的结构如图1所示。化合物4,无定形粉末,高分辨质谱给出分子离子峰486.1686(calcdforC29H26O7:486.1679),显示其分子组成为C29H26O7,揭示该化合物也为白藜芦醇的二聚体.IR光谱显示有羟基(3354cm－1)、双键(1699cm－1)和苯环(1603,1511,1453cm－1)的吸收.其1HNMR谱(500MHz,acetone-d6,表1)显示有两套AB2系统,两套A2B2系统,一对相互偶合的双键氢信号,一对相互偶合的脂肪氢信号,以及一个甲氧基单峰信号.结合碳谱中相应的碳信号,显示化合物4与化合物3具有相同的分子骨架,比较它们的NMR谱发现它们结构相似,差别在于化合物3的C-7a位为一个羟基信号,而化合物4的C-7a位为一个甲氧基信号.同时,化合物4中观察到C-7a的化学位移较化合物3中 相应的碳信号向低场位移了δ9.31,显示甲氧基取代在C-7a位。
     同时,HMBC谱(图3)显示H-7a的信号与甲氧基的碳信号有相关,进一步证实了甲氧基取代在C-7a位.另外,HMBC谱还显示H-8a与C-4b有相关信号,证实两个白藜芦醇单体通过C-8a和OH-4b形成醚键相连.根据以上推断,初步确定了化合物4的平面结构.化合物5,无定形粉末,高分辨质谱显示其分子离子峰为486.1681(calcdforC29H26O7:486.1679),对应的分子组成为C29H26O7,揭示5与4一样,也是一个白藜芦醇的二聚体.比较化合物5与4的IR,UV以及NMR谱(包括1D,2DNMR谱),发现它们结构相同,在光谱上没有明显区别.因此确定两个化合物具有相同的平面结构.反相C-18HPLC检测发现这两个化合物为保留时间相差较小的色谱峰,以上信息推断两个化合物可能为C-7a,C-8a位构型不同的异构体.应用与化合物3相同的方法进行构象分析,观察到在化合物4与5中,虽然甲氧基取代了羟基,不能形成具有氢键的刚性结构,但是两个不对称碳上均具有体积较大的取代基.据此推测,它们与化合物3应该有相似的优势构象.在化合物4和化合物5的1HNMR谱中观察到H-7a和H-8a的偶合常数分别为J7,8＝6.5Hz和J7,8＝6.0Hz,即化合物4的偶合常数较化合物5大,由此可以初步推断化合物4为苏式构型(threoform),化合物5为赤式构型(erythroform)。
     另外,根据文献报道[12],对于该类构型化合物中的相应不对称碳原子,苏式比赤式化合物的碳信号化学位移移向更低场.在化合物4和5的13CNMR谱中观察到化合物4的C-7a和C-8a位的化学位移[δC:87.56(C-7a),84.27(C-8a)]比合物5中相应碳的化学位移[δC:87.26(C-7a),83.49(C-8a)]位于更低场,从而进一步证实了该结构推断的正确性.在这两个化合物中,由于C-7a位的甲基取代了羟基,不能形成氢键以稳定其优势构象,因此苏式和赤式结构中相应氢的偶合常数以及相应碳的化学位移差别较小。基于1HNMR和13CNMR光谱分析(包括NOESY谱)结合相应的文献对照,化合物1,2,6和7分别被鉴定为resveratrol(E)-dehydrodimer[13],resveratrol(Z)-dehydrodimer[6,7],parthenostilbeninA[14]和parthenostilbeninB[14],四个化合物均与天然产物结构一致。
     根据该反应所得化合物的结构,参考文献相关报道[7,8],对化合物1～7可能的形成机理推测如下:在单电子氧化剂AgOAc的作用下,白藜芦醇首先形成4-OH自由基[A](图4),该自由基通过电子的离域化重排进一步产生了相应的自由基[B]和[C].在此基础上,不同的(或相同的)自由基以不同方式偶联形成了不同结构类型的白藜芦醇二聚体衍生物.首先,自由基[B]和[C]偶联形成的醌式中间体通过进一步的互变异构重排和分子内亲核进攻形成了化合物1.化合物1的反式双键异构化为顺式双键产生了相应的化合物2.其次,甲醇或水对自由基[A]和[C]偶联形成的醌式中间体进行亲核进攻,形成了甲氧基或羟基取代的开链式产物3,4和5.最后,两分子自由基[C]发生自身偶联后进一步进行分子内环合形成醌式中间体,作为溶剂的甲醇进一步对该中间体进行亲核进攻最终生成了化合物6和7(图5).显然,在这些反应中,由于发生在自由基间的偶联是随机的,甲醇或水对相应醌式中间体的亲核进攻既可以发生在Re面,也可以发生在Si面,因此所形成的化合物包括了构型不同的立体体.另外,根据文献报道[7],在二苯乙烯单体的氧化偶联反应中,二聚体的产生是不同自由基偶联的结果,而不是自由基进攻中性分子产生的.在本反应中,自由基[A]和[B]位阻较小,容易与自由基[C]偶联形成呋喃型衍生物和开链式二聚体.相反,两分子的自由基[C]相偶联时位阻较大,偶联几率较小.因此,呋喃型二聚体和开链式二聚体产率较高,茚型衍生物的产率较低.化合物3仅为微量产物,原因在于反应是在无水条件下进行的,仅有极微量的水分子参与了反应。
     对所得7个化合物进行了LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子NO生成的抑制活性测试.实验结果显示,在浓度为10μmol•－1时,化合物1和4对小鼠腹腔巨噬细胞分泌的NO具有一定的抑制活性,抑制率分别为14.8和21.6%(阳性对照药地塞米松为82.2%),其余5个化合物在该模型上均没有显示明显的活性。
     2结论
     对以AgOAc为氧化剂的白藜芦醇氧化偶联反应进行了深入研究.结果表明,该反应可以产生三种不同结构类型的化合物:呋喃型二聚体,开链式二聚体以及茚型二聚体;反应中,溶剂分子会参与反应.所得产物中,呋喃型二聚体和开链式二聚体为主产物,茚型二聚体为微量产物.化合物3,4和5为新结构化合物;化合物6和7为首次人工合成的天然产物.以AgOAc为氧化剂进行白藜芦醇的氧化偶联反应所得副产物较多,该反应不是制备化合物1的理想条件.本研究首次以非酶氧化剂进行二苯乙烯单体的氧化偶联反应获得了链式结构的白藜芦醇二聚体。
     3实验部分
     3.1仪器与试剂
     旋光用JascoP-2000旋光仪(日本Jasco公司)测定。ESI和HRESIMS质谱用AccuToFCSJMST100CS质谱仪(美国Agilent公司)测定。UV光谱用JASCOP650紫外光谱仪(JASCO)测定.IR用美国Thermo公司Nicolet5700FT-IR显微红外光谱仪测定.1D和2DNMR用美国VarianINOVA500型核磁共振光谱仪(美国Varian公司)和德国BrukerAVANCEIIIHD600型核磁共振光谱仪(德国Bruker公司)测定.HPLC为Waters515高压液相色谱泵(美国Waters公司)配备Waters2487双波长紫外吸收检测器(美国Waters公司).制备色谱柱为Rp-18(5μm,250mm×20mm,YMC公司),半制备色谱柱为Rp-18(5μm,250mm×10mm,YMC公司).色谱用硅胶和硅胶预制板为青岛海洋化工集团公生产.所用试剂若无特别说明均购自北京化工厂,级别为分析纯或色谱纯。