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溶脲脲原体的微生物学检验

发布时间:2017-09-11 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1142

溶脲脲原体(U.urealyticum,Uu)又称解脲脲原体,主要寄居于泌尿生殖道,在特定条件下可致病,是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体之一。因其菌落细小,直径为10~40um,故称其为“T”株(tiny strain)。因能分解尿素而命名为溶脲脲原体,在分类学上属于支原体科脲原体属。

一、生物学特性

1.形态染色溶脲脲原体以球形为主,常呈多形性,直径为50~300 nm,单个或成双排列。革兰染色阴性,但不易着色,Gtemsa染色法染成紫蓝色。无细胞壁,支原体的胞浆外围是以三层结构组成的细胞膜。

2.培养特性微需氧,营养要求高,培养基中需加入胆固醇和酵母浸膏,最适pH值为6.0~6.5,在5% CO2 90% N2及37℃条件下生长最佳。在固体培养基上37℃培养一般2天后即出现菌落,直径为10~40um,呈“油煎蛋”样,放大200倍才能观察到。

3.生化反应 能分解尿素产氨,不分解葡萄糖精氨酸(表25-2)。

4.抗原与分型 除蛋白质抗原和糖脂抗原外,还有脲酶抗原,脲酶抗原是Uu的种特异性抗原。有16个血清型,其中以第4血清型致病性较强。

5.基因组基因组为一环状双链DNA,大小为((4.1~4.8)×108 bp,G+C的摩尔分数为26.9%~29.8%。

6.抵抗力由于没有细胞壁,故对环境渗透作用敏感。对铊盐敏感,0.05%醋酸铊能抑制其生长。不耐热,较耐低温,4℃存活约2周,-70℃可存活2~3年。对作用于细胞壁的抗菌药物(如青霉素头孢菌素等)不敏感,但对影响胞浆蛋白合成的抗菌药物(如红霉素螺旋霉素多西环素等)敏感。

二、临床意义

Uu多寄生在人类泌尿生殖道中,主要传播途径为性接触传播和母婴传播。所致疾病最常见的为非淋菌性尿道炎,占30%~40%。一般为表面感染,大多不侵入血流。Uu的致病机制尚不十分清楚,目前认为可能与其侵袭性酶和毒性产物有关。溶脲脲原体还可上行感染,引起男性前列腺炎、附睾炎,女性阴道炎、宫颈炎,孕妇感染可导致胎儿流产、早产、低体重儿以及新生儿呼吸道和中枢神经系统的感染。

Uu感染还与不孕有关,导致不孕的原因有以下几个方面:① Uu可以导致生殖道炎症,使脲膜细胞坏死,输卵管纤毛运行停滞;②Uu吸附于精子的表面,可阻碍精子运动,或产生神经氨酸酶样物质干扰精卵细胞的结合;③与人精子膜有共同抗原,对精子可造成免疫损伤;④可能诱导感染的生精细胞凋亡。

三、微生物学检验

(一)检验程序

溶wx原体的检验程序见图25-3。

图25-3溶脲脲原体的检验程序

(二)标本采集

采集精液、前列腺液、阴道或宫颈炎性分泌物、尿液等标本。分离培养时应接种新鲜标本,若不能立即接种时,应将标本置于4℃冰箱暂存,于12h内接种。

(三)标本直接检查

1.核酸检测采用PCR或特异性核酸探针检测患者标本中的溶脲脲原体DNA。用于PCR检测的靶基因主要有尿酶基因,其PCR产物特异性高。也可以16S rRNA和MB(multiple-banded)抗原基因作为靶基因。

2. ELISA可以测定其血清型别,该方法敏感、特异性高,有早期诊断意义。

3.免疫斑点试验(immunodot test,IDT)采用IDT检测Uu培养物和抗原提取物,此法快速、敏感、特异性高,且不需要特殊仪器,易于推广。

(四)分离培养与鉴定

分离培养Uu相对容易且快速。取0.1~0.2 mL一标本接种于液体培养基中(内含酚红和尿素,pH值为6.0±0.5),置5% CO2和95% N2环境中,37℃孵育,观察颜色变化,由黄色变为红色者判断为阳性。阳性者取0.2 mL培养物转种于相应的固体培养基上,培养1~2天后在低倍镜下观察,有典型“油煎蛋”状菌落者为阳性。此外,在含有尿素、0.05mol/L的HEPES缓冲液和氨敏指示剂(如硫酸亚锰或氯化钙等)的琼脂培养基上,Uu的菌落黑褐色,易于辨认。通过形态和生化反应等可初步鉴定,进一步鉴定则需要特异性抗血清作MIT和GIT。

(五)血清学试验

可采用ELISA检测患者的血清抗体,但由于Uu通常为浅表感染,血清抗体的效价低且不稳定,另外,某些无症状者血清中也可存在低效价的抗体,所以,血清学检查的诊断意义不大。

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