一、抗分枝杆菌药物

分枝杆菌属包括结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌以及麻风分枝杆菌。抗结核分枝杆菌药物对后两者均具有不同程度的抗菌作用，故在此介绍抗结核分枝杆菌药物。常用于抗结核分枝杆菌的5种一线药物有链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺；7种二线药物有乙硫异烟肼、卷曲霉素、环丙沙星、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、利福布汀。

二、结核分枝杆菌体外药敏试验

近年来，结核分枝杆菌对临床常用的抗结核一线药物均有耐药现象出现，甚至出现了耐多药以及泛耐药的结核分枝杆菌。因此，对所有临床初次分离的结核分枝杆菌都应当做AST。如果经过3个月正规的临床治疗后患者仍然结核分枝杆菌培养阳性或者疗效不佳，则应该重复AST。此外，对于分枝杆菌感染的严重疾病以及来自高耐药结核分枝杆菌流行区的患者，都应进行AST。

初次分离的结核分枝杆菌常规检测5种一线药物的AST，一旦其中任何一种药物出现了耐药，则应当检测7种二线药物的AST。型变异是结核分枝杆菌慢性感染持续存在的重要原因之一，对高浓度的链霉素、异烟肼和乙胺丁醇常不敏感，因此，对检出的结核分枝杆菌L二型应做AST，以帮助临床制定合理的治疗方案。

如采用常规的AST纸片法，由于分枝杆菌生长缓慢，在其生长之前药物已经扩散至培养基中，不能体现药物的抑菌作用，故常规的AST纸片法不适用于结核分枝杆菌。结核分枝杆菌体外药敏试验的常见方法有以下五种：仪器法、比例法、绝对浓度法、耐药率法和E-试验。此外近年来还出现噬菌体生物扩增法和刃天青显色法。这些方法都可分为直接法和间接法：①若标本涂片每100个油镜视野超过50个抗酸杆菌，可直接用标本进行药敏试验，称为直接法，优点是能较为快速获得药敏结果，缺点是不够标准化和易污染；②采用分纯后的次代培养菌进行药敏试验为间接法。以下对结核分枝杆菌五种AST方法进行简单介绍。

1．仪器法仪器检测系统有BACTEC 460TB,BACTEC MGIT 960,MB/BacT Alert3D,ESP结核分枝杆菌检测系统，采用液体培养基，原理同比例法，能检测结核分枝杆菌对所有一线和二线药物的敏感性。细菌生长代谢产生CO₂，因此，可通过检测CO₂的量来判断细菌的生长情况。将细菌同时接种于含药管和无药管，然后比较两管中CO₂的比例和数量。BACTEC 460TB采用放射性同位素法检测CO₂,BACTEC MGIT 960采用检测荧光、MB/BacT Alert 3D和ESP采用测量气体的方法来检测CO₂。该方法操作简单，出结果较为快速，但是也存在设备昂贵、放射性污染等缺点。

2．比例法比例法和BACTEC放射性同位素法是美国最常用的结核分枝杆菌AST方法，比例法也受到WHO全球结核耐药检测方案推荐。对于每一种受试药物，将不同稀释度的菌液加入含药7H10琼脂格和一个无药对照7H10琼脂格，比较在含药和无药琼脂上细菌的生长比例。每周观察一次，3周后报告结果。当含药琼脂格内无受试菌生长，或菌落数不大于对照格菌落数的1％则判为敏感；当含药琼脂格菌落数大于对照格菌落数的1％则判为耐药。同批次应采用质控菌株进行质量控制。

3．绝对浓度法将定量的细菌接种于一个无药对照培养基和几个梯度药物浓度的培养基，能够抑制所有或几乎所有细菌生长的最低药物浓度，即为此药物的MIC。

4．耐药率法将受试菌和标准实验室菌株进行耐药率的比较。2株细菌平行试验，在含有连续对倍稀释药物浓度的培养基上接种定量的细菌，耐药率以受试菌的MIC与标准菌的MIC比率表示。

5. E-试验这是一种定量检测的方法，操作简便，结果准确、快速，且可用于联合药敏试验，易于标准化操作和质量控制，缺点是成本较昂贵。

CLSI推荐10种耐药表型不同的结核分枝杆菌作为质控菌株进行AST的质量控制，如下：H37Rv ATCC27294为一线、二线药物的敏感质控菌株；H37Rv ATCC35820为链霉素耐药质控菌株；H37Rv ATCC35821为氨基水杨酸耐药质控菌株；H37Rv ATCC35822为异烟肼耐药质控菌株；H37Rv ATCC35826为环丝氨酸耐药质控菌株；H37Rv ATCC35827为卡那霉素耐药质控菌株；H37Rv ATCC35828为吡嗪酰胺耐药质控菌株；H37Rv ATCC35830为乙硫异烟胺耐药质控菌株；H37Rv ATCC35837为乙胺丁醇耐药质控菌株；H37Rv ATCC35839为利福平耐药质控菌株。

三、快速生长的分枝杆菌体外药敏试验

非结核分枝杆菌相对于结核分枝杆菌来说更需要个性化治疗，治疗方案基干分枝杆菌的种类、感染的部位和严重程度、AST结果、基础疾病以及患者的一般情况。对于所有临床上重要的快速生长的分枝杆菌，如：偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌都应该做体外药敏试验，方法有肉汤稀释法和琼脂纸片洗脱法。肉汤稀释法与需氧和兼性厌氧菌的肉汤稀释法类似，为CLSI推荐的方法。如果经过6个月正规的临床治疗后患者仍然分枝杆菌培养阳性或者疗效不佳，则应该重复AST。