一、生物安全基本设备

1．生物安全柜生物安全柜（biological safety cabinets, BSCs）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。必须由专人安装，定期监测、维护，遵循标准化操作规程。生物安全柜根据其人口气流风速、再循环空气量、排出空气量、排风系统、压力设置等分为三级。

①Ⅰ工级生物安全柜：工作原理为空气以0.38 m/s的速率自开口处进入，将工作台面形成的气溶胶送入排风管，通过高效空气过滤器（high-efficiency particulate air filter,HEPA)，经实验室或建筑物排风系统排出，或直接排出建筑物，以保护操作者和环境，不保护操作对象。

②Ⅱ级生物安全柜：流过工作台面的空气经HEPA过滤后无菌，且柜内保持负压状态，对操作者和操作对象都有保护作用。Ⅱ级生物安全柜分为Al,A2,Bl,B2四个类型，可用于操作危险度为2级和3级的微生物，穿王压防护服时可处理危险度为4级的微生物。

③Ⅲ班级生物安全柜：工作空间内为经HEPA过滤器净化的无涡流的单向流空气，排出气流经双层HEPA过滤，所有接口“密封”为负压。适用于三级和四级生物安全水平实验室，用于操作危险度为4级的微生物，对操作者防护最好。

有些操作应在生物安全柜内进行：处理感染性物质；处理潜在空气传播的物质；离心前后封闭离心杯的装样、取样：可能产生气溶胶的操作（离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开有感染性或潜在感染性物质的密闭容器、动物鼻腔接种以及采集动物或卵胚感染性组织等）。实验者应在生物安全柜中后部操作，并能通过玻璃挡板观察和操作；使用中玻璃挡板不可打开；柜内尽量少放器材或样本，以免影响气流循环；操作前后至少运行5 min;不可在生物安全柜内进行文字工作。

2．高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器是一个密闭的、可以耐受一定压力的双层金属锅。锅底或夹层内盛水，加热产生蒸汽，随着蒸汽压力不断增加，温度随之升高，通常压力在103.4 kPa时，高压蒸汽灭菌器内温．度可达121.3℃，维持15～20 min可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。如果灭菌物品体积较大，蒸汽穿透困难，可以适当提高蒸汽压力或延长灭菌时间。此法常用于一般培养基、生理盐水、手术器械及敷料等耐湿和耐高温物品的灭菌。

高压蒸汽灭菌器使用时的注意事项：待灭菌的物品放置不宜过密；必须将冷空气充分排出，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；灭菌完毕后，不可快速放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢，甚至导致容器爆裂。必须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。

3．个人防护设备个人防护设备用以保护操作人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、喷溅物以及意外接种等）的危险中。根据危害度评估及工作性质选择并按要求使用个人防护设备，对个人防护设备应及时进行维护。个人防护设备如下。

(1)防护衣：背面开口，罩于日常服装外，防止污染衣服，当可能发生喷溅时，使用塑料围裙或防水长罩服，必要时可穿戴其他个人防护设备（如防护镜、头面部保护罩等）。

(2)面部防护用具：如护目镜、安全镜、防毒面具等，为防止眼腈或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。

(3)手套：在接触感染性物质时，必须使用合适的手套以保护操作者避免受到污染物溅出、生物污染或切割损伤。手套类型有乳胶橡胶、丁腈类、聚氯乙烯、不锈钢网孔手套等。使用手套要确保有效遮盖、无漏损，要完全遮住手及手腕，必要时应戴防护服衣袖。

(4）鞋：实验应穿舒适、防滑、不露脚趾的鞋，避免碰撞和喷溅暴露。推荐穿着皮质或合成材料防水鞋。可能发生泄漏时应穿一次防水鞋。特殊区域穿专用鞋（如防静电要求三级和四级生物安全水平实验室需使用一次性或橡胶靴）。

(5)呼吸防护用具：必要时穿戴正、压面罩、个人呼吸器和正压防护服等，以防止吸入气溶胶。操作可能产生高危害气溶胶时，应选择适宜的个人防护装备、生物安全柜和其他物理防护设备。

值得注意的是，使用前应仔细检查个人防护设备，不能使用标志不清、破损或泄漏的防护用品，离开实验区域前应脱卸个人防护设备并洗手。污染的个人防护设备应及时更换，并置于有标识的防渗漏袋内。

4．超净工作台（clean bench)超净工作台是一种局部层流装置，能形成局部洁净无菌的工作环境。室内空气经预过滤器和高效过滤除尘，吹过操作区域的垂直层或水平层可防止工作区域外粉尘或微生物的污染，使操作区保持无菌状态。超净工作台操作方便、无菌效果可靠、无消毒药剂、对人体危害小、占用面积小。但预过滤器和高效过滤器需要定期清洗和更换。

二、实验设备

1．培养箱（culture box）培养箱是培养细菌、真菌等微生物的专用设备。其原理是应用人工的方法（如控制一定的温度、湿度、气体等），在培养箱内造成微生物生长繁殖的人工环境。可根据微生物生长环境的需要，选择结构合理、功能齐全的培养箱，如恒温培养箱、恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱和三气培养箱等。

培养箱应由专人负责管理，操作盘上的任何开关和调节旋钮一旦固定后不要随意扭动，以免影响箱内温度、CO₂浓度和湿度，同时降低机器的灵敏度。箱内加入的水必须是蒸馏水或无离子水；箱内应定期用消毒液擦洗消毒，搁板可取出清洗消毒；定期检查调温安全装置；使用的CO₂必须纯净，如长期不使用CO₂时应将其关闭。

2．冰箱冰箱主要用于微生物菌种保藏。低温冷冻冰箱温度一般控制在-40～-80℃。普通冰箱内为4℃，常用于保存斜面菌种，保藏时间在3个月左右，超过3个月，斜面就会变干，因此，需要转种菌种。低温冷冻冰箱（-4℃～-80℃）用于长时间保存菌种，保藏时间一般在1年以上。

3．离心机离心机安置高度以操作者能正确放置十字轴和离心杯为宜。在生物安全柜内装载、平衡、密封或打开离心杯；每次离心后应清理离心杯、转子和离心机内的污染物；每次使用前应检查转子、离心杯有无腐蚀或细微裂痕及离心机内腔的清洁状态，如污染明显应重新评审离心操作程序。

4．接种环建议使用一次性接种环，或直径为2～3 mm、封闭、长度小于6 cm的接种环，以减少抖动，避免接种物洒落。为避免爆溅，建议采用封闭式微型电加热器灭菌。