通过体外分化诱导模型筛选出的分化诱导物质，需要用到动物实验构建体内分化诱导模型，进行分化诱导效果的验证。分化效果的判定主要根据肿瘤生长抑制和荷瘤鼠生命延长来确定。还可应用组织化学方法观察切片中细胞标记酶和抗原的变化，以及形态的变化来判断。

1. HL-60细胞昆明鼠体内分化诱导模型

【材料】

(1)试剂：待检测药物，维A酸（阳性对照），环磷酰胺凝血酶，纤维蛋白原、RPMI 1640和DMEM培养液。

(2)细胞培养及实验动物：人急性早幼粒白血病细胞（HL-60）用RPMI 1640培养液培养备用，昆明小鼠。

【方法】

(1)先将HL-60细胞制成纤维蛋白凝块：取对数生长期的HL-60细胞，3000r/min，离心5分钟，调至4x10⁷/ml。先后加入纤维蛋白原和凝血酶工作液使之形成细胞凝块，在培养液中切成等体积小块用于移植。

(2）取25～28g的昆明种小鼠，接种前一天腹腔注射环磷酰胺（150mg/kg）以抑制其机体免疫反应。移植时将凝块插入到肾囊膜下。待检药物可以分成多个剂量组，维A酸阳性对照组用llmg/kg。给药前动物随机分组，每组动物数8只。接种后次日腹腔注射给药，连续7天，空白对照组给生理盐水。第8天处死动物，在解剖镜下测量肿瘤长短径。

【结果】

(1)肿瘤体积=长径x短径x短径/2。

(2）抑瘤率＝（对照组瘤体积-用药组瘤体积）／对照组瘤体积x100%。

(3）切片：将荷瘤鼠肾在10％甲醛中固定，用石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察。形态变化。

2．人肝癌细胞Smmu 7721-裸鼠体内分化诱导模型。

【材料】

（1）试剂：待检测药物，RPMI 1640和DMEM培养液。

(2）细胞培养及实验动物：人肝癌细胞Smmu7721以RPMI 1640或DMEM培养液培养备用，裸鼠。

【方法】

(1) 6周龄雄性裸鼠，体重为18～20g，分为对照组和实验组。

(2)人肝癌细胞Smmu7721经培养后以2x10⁷细胞接种于小鼠背部皮下，待瘤长至2.5～3.5mm时（一般约4～5周）即开始作治疗实验。

(3）待检药物于腹腔内注射，每周5天，连续10周。每周测一次体重及肿瘤大小。

(4) 10周后小鼠以乙醚麻醉处死，解剖检测肿瘤大小，然后取下肿瘤组织，一部分甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色；一部分冷冻包埋，免疫染色，作免疫组织病理学观察。