经研究，小麦粉增白剂过氧化苯甲酰(又称“面粉改良剂”)添加到面粉中后，在给面粉增白的同时，还逐渐地被还原为苯甲酸，通常的检测方法都是采用高效液相色谱法检测苯甲酸，来达到检测过氧化苯甲酰的目的。本研究采用甲醇作为提取溶剂，高效液相色谱法同时测定面粉中过氧化苯甲酰和苯甲酸的含量，从而能更加精确地反映小麦粉中的过氧化苯酰含量。该方法样品前处理简单，两种组分分离效果好，无杂峰及拖尾现象，回收率高。同时利用该方法对小麦粉中添加微量过氧化苯甲酰之后，过氧化苯甲酰和苯甲酸含量变化作了进一步的研究。实验证明，过氧化苯甲酰含量逐渐降低，苯甲酸含量逐渐升高。

一、材料与方法

1.试剂与材料

(1)过氧化苯甲酰标准品:固体，瑞典进口试剂，含量为95%。

(2)苯甲酸标准品:固体，99.95%，德国Dr。

(3)甲醇(色谱纯)。

(4)小麦粉。

2.液相色谱分离条件

LC-20AT岛津高效液相色谱仪，DGU-20A5在线脱气机、LC-20AT输送泵、SIL-20A自动进样器、CTO20A柱温箱、SPD-20A紫外检测器、CBM-20A系统控制器、LC-Solution操作控制系统。

色谱柱:C1810μm，4mmid×250mm不锈钢柱(Promsile)。

紫外检测器:检测波长235nm。

流动相:流动相A∶流动相B=82∶18。

流动相A:水∶冰醋酸=1000∶1。

流动相B:乙腈∶冰醋酸=1000∶1。

流速:1.2mL·min。

柱温:40℃。

进样量:10μL。

3.标准溶液配制

称取0.1000g左右(本文用到的过氧化苯甲酰标准品的含量为95%，苯甲酸标准品含量为99.5%，折算后过氧化苯甲酰称取0.1053g，苯甲酸称取0.1005g)过氧化苯甲酰标准品和苯甲酸标准品，加少量甲醇溶解后用甲醇定容至100mL，配制成1.0000mg/mL的标准储备液。分别吸取20mL和10mL标准储备液用甲醇定容至100mL，配制成0.0500mg/mL和0.1000mg/mL的工作液，按照逐级稀释的原则，分别量取相应的体积将其稀释后，配制成0.0050mg/mL、0.0125mg/mL、0.0250mg/mL、0.0500mg/mL的标准工作溶液。

4.小麦粉样品处理及测定

称量小麦粉样品5.00g左右，加入甲醇20mL，振荡器上振荡30min后，定容至50mL，过滤，取滤液10mL，12000rpm/min离心5min，经过0.45μm过滤头过滤后，进样。

5.数据分析

X=(C0×V/m)×0.992+C1×V/m

式中:X——过氧化苯甲酰的含量，g/kg；C0——样液中苯甲酸质量浓度，mg/mL；V——样液体积，mL；C1——样液中过氧化苯甲酰的质量浓度，mg/mL；m——样品质量，g。

0.992是苯甲酸转化为过氧化苯甲酰的换算系数。

二、结果与分析

1.色谱分离结果

在上述色谱分离条件下，过氧化苯甲酰和苯甲酸标准溶液能得到很好分离。其中苯甲酸保留时间为3.946min，过氧化苯甲酰保留时间为7.295min，峰形尖锐，无杂峰、拖尾峰、前置峰等现象。处理后的小麦粉样品峰形较好，样品出峰处无杂峰干扰。采用外标法定量，苯甲酸及过氧化苯甲酰在(0.005～0.050)mg/mL范围内有较好的线性关系(见图1)。R^2=0.9999769。添加回收率表明，过氧化苯甲酰回收率在96.0%～99.3%，苯甲酸回收率为91.3%～95.7%(见表1)。

<CTSM> 图1 苯甲酸标准工作曲线</CTSM>

<CTSM>表1过氧化苯甲酰和苯甲酸添加回收率实验结果</CTSM>

2.过氧化苯甲酰及其还原产物苯甲酸在小麦粉中含量的动态变化

在1kg面粉中加入60mg过氧化苯甲酰，此时面粉中过氧化苯甲酰为60mg/kg，充分混匀后避光保存。此后8h监控过氧化苯甲酰和苯甲酸的含量变化。每2h取一次样上机测定二者含量。结果表明，刚加入过氧化苯甲酰的小麦粉中过氧化苯甲酰含量为59.0mg/kg，经过3h的漂白后，过氧化苯甲酰的含量显著降低为5.6mg/kg，8h后几乎降为0。而苯甲酸的含量在刚加入过氧化苯甲酰时为5.6mg/kg，3h后增至最高值17.4mg/kg，此后苯甲酸的含量慢慢降低到13.0mg/kg(见图2)。

<CTSM>图2小麦粉中过氧化苯甲酰和苯甲酸含量的动态变化</CTSM>

三、讨论

1.提取剂的选择

过氧化苯甲酰易溶于苯、乙醚等非极性溶剂，微溶于甲醇，但是苯、乙醚等非极性溶剂溶解过氧化苯甲酰的同时，也会溶解面粉中的其他脂溶性物质，引进大量干扰物，而甲醇极性较大，脂溶性较差，在超声震荡的条件下，可以完全快速溶解面粉中添加的少量过氧化苯甲酰，而苯甲酸易溶于甲醇，故本实验选择甲醇为提取剂。由于过氧化苯甲酰微溶于甲醇，因此在配制标准溶液时若溶解不充分，非常容易析出，从而造成未能检出的假象。因此，在配制标准溶液以及小麦粉加入甲醇提取时都要溶解充分后方可定容。

2.检测波长的选择

以甲醇溶液作参比，测定过氧化苯甲酰的紫外吸收光谱，结果表明过氧化苯甲酰在(225～238)nm处有较大吸收，考虑到食品中其他成分的影响，选定检测波长为235nm。

3.流动相的选择

以水-乙腈溶液为流动相时，过氧化苯甲酰的峰形较好，但苯甲酸无法分离出来，采用加入少量冰醋酸后，过氧化苯甲酰和苯甲酸可以得到较好分离，故选用0.1%冰醋酸水溶液-0.1%冰醋酸乙腈溶液(体积比为82∶18)为流动相作为过氧化苯甲酰和苯甲酸标准色谱分析条件。

4.过氧化苯甲酰的转化

过氧化苯甲酰由于增白效果明显，价格便宜，在2011年5月1日前一直是允许添加到小麦粉中起到增白效果，之后便被禁用。过氧化苯甲酰和苯甲酰在加入小麦粉后，在完成增白的同时，本身也转化为苯甲酸，而过氧化苯甲酰和苯甲酸一个属于增白剂另一个属于防腐剂，所以在当时有些小麦粉中检测出了苯甲酸(防腐剂是不得在小麦粉中添加的)，而企业却并未曾添加过，原因之一就是过氧化苯甲酰的转化。

我国目前过氧化苯甲酰的检测方法主要有气相法和液相法两种，均是将小麦粉中的过氧化苯甲酰加入还原剂后还原成为苯甲酸后完成检测。国标GB22325-2008《小麦粉中过氧化苯甲酰的测定高效液相色谱法》是通过加入50%碘化钾5mL将过氧化苯甲酰还原为苯甲酸，在笔者看来加入的碘化钾浓度过高，体积过大。根据以上数据可看出，实际上在检测时大部分的过氧化苯甲酰已转化为苯甲酸，加入如此大浓度、大体积的碘化钾对液相色谱柱的损害极大，并在色谱分离时会在目标物出现之前出现一个超级大峰，不利于目标物的分离。