小蔓长春花组织培养物中长春胺的含量测定
来源/作者:中国标准物质网  日期:2016-03-10

小蔓长春花(Vincaminor)是原产欧洲、西亚、中亚和北美的多年生草本蔓生植物,其中长春胺(vincamine)是该植物中有重要药理活性的吲哚生物碱之一,不但用于治疗心脑血管疾病,同时也是这类药物的重要合成原料。通过薄层扫描法测定小蔓长春花组织培养物中长春胺含量,这在小蔓长春花组织培养的研究中具有一定的应用价值。

1.薄层色谱条件

将标准品、样品溶液用微量进样器点在105℃活化1.5h后的薄层板上,放入盛有展开剂(石油醚-氯仿-甲醇,10:10:1.2)和用浓氨水饱和20min的密闭的层析缸中,上行展开8cm后,取出吹干。用改良Dargendoff试剂喷洒显色,同时用一同样大小的玻板覆盖、密封,然后进行长春胺色点的扫描测定。

2.薄层扫描条件

将长春胺标准品样液点样适量,展开,显色后于370-700nm波段扫描。根据对标准品的扫描结果,确定测定波长λS=490nm,参比波长λR=550nm;光束狭缝1.25mm×1.25mm,灵敏度×1,采用双波长反射锯齿扫描法,扫描速度为20mm/min,纸速为20mm/min。

3.样品的预处理

将收获的小蔓长春花组织培养物在60℃的干燥箱内干燥后,用粉碎机粉碎,精密称取粉末5.0g,加入少量浓氨水湿润,置索氏提取器中,加入一定量的氯仿回流提取至无生物碱反应,约6h,回收氯仿,剩余物以2%硫酸液提取多次,合并滤液,适当浓缩后,用氨水调至pH为8.5,再用氯仿萃取至氯仿层无色,回收氯仿,残渣以氯仿溶解转移,并用氯仿定容至5mL,供点样用。

4.结果

在同一薄层板上分别点上标准品样液1.0μL、2.0μL和样品液1.0μL、2.0μL,展开、显色,按上述条件进行测定。并以外标两点法测定,计算出样品中的含量。测得在固体和液体培养基Bh上生长的由根、茎、叶诱导产生的培养物种长春胺含量分别为(0.62±0.22)%、(0.31±0.07)%、(0.39±0.10)%和(0.59±0.09)%、(0.56±0.15)%、(0.52±0.07)%。

【关键词】组织 培养物 长春胺 含量测定