凡对紫外光有吸收并能放出更长波长光的化合物可以进行荧光测定，光源用氛灯或汞灯。测定时先在紫外区选择最大吸收波长作为该化合物的激发光波长λem。固定λem后，再选择合适波长作为发射光波长λem。荧光测定法专属性强，灵敏度高，定量线性范围宽。其灵敏度最低可测至10-50μg，相当于吸收测定法的100-1000倍，同时基线比较稳定，可避免很多杂质的干扰。

荧光淬灭法是利用某些化合物减弱吸附剂中荧光剂的紫外吸收强度而进行定量的方法。