总大肠菌群是指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽抱杆菌。主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。

总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可适用于各种水样（包括底泥），但操作较繁，需要时间较长；滤膜法主要适用于杂质较少的水样，操作简单快速。

如果是使用滤膜法，则总大肠菌群可重新定义为：所有能在含乳糖的远腾氏培养基上，于37℃ 24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧的和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。粪便中存在有大量的大肠菌群（coliform group）细菌，在水体中存活的时间和对氯的抵抗力等与肠道致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌等相似，因此将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌是合适的。但在某些水质条件下，大肠菌群细菌在水中能自行繁殖，这是不利之处。

（一）多管发酵法

多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。

1．培养基

①乳糖蛋白脉培养液。

②三倍乳糖蛋白脉培养液：乳糖蛋白陈培养液浓缩三倍配制。

③品红亚硫酸钠培养基。

④伊红美蓝培养基。

2．步骤

(1)生活饮用水

①初发酵试验：在二个装有已灭菌的50m1三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液的大试管或烧瓶中（内有倒管），以无菌操作各加入已充分混匀的水样100m1；在10支装有已灭菌的5m1三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样l0ml,混匀后置于37℃恒温箱培养24h。

②平板分离：经初发酵试验培养24h后，发酵试管颜色变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气。将产酸产气及只产酸发酵管，分别用接种环划线接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，置37℃恒温箱内培养18-24h，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。

品红亚硫酸钠培养基上的菌落：紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。

伊红美蓝培养基上的菌落：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。

③复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽胞的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中（内有倒管），每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1-3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸产气者，即证实有大肠菌群菌存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表5-2-9，报告每升水样中的大肠菌群数。

(2）水源水

①将水样作1：10稀释。

②于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的五个试管中（内有倒管），各加l 0ml水样；于各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的五个试管中（内有倒管），各加lml水样；于各装有l0ml乳糖蛋白陈培养液的五个试管中（内有倒管），各加入1ml 1：10稀释的水样。共计15管，三个稀释度，将各管充分混匀，置于37℃恒温箱培养24h。

③平板分离和复发酵试验的检验步骤同（1)“生活饮用水”检验方法。

④根据证实总大肠菌群存在的阳性管数，求得每100m1水样中存在的总大肠菌群数。

(3）地表水和废水

①地表水中较清洁水的初发酵试验步骤同（2)饮用水源水检验方法。有严重污染的地表水和废水初发酵试验的接种水样应作1：10, 1：100, 1：1000或更高的稀释，检验步骤同（2)饮用水源水检验方法。

②如果接种的水样量不是10ml, l ml和0.lml，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表求得MPN指数，再经下面的公式换算成每l00ml的MPN值。

MPN值＝MPN指数×10(m1)/接种量最大的一管（ml)

我国目前以1L为报告单位，MPN值再乘10，即为1L水样中的总大肠菌群数。